Kang CC, Yamauchi KA, Vlassakis J, Sinkala E, Duncombe TA, Herr AE. Single cell-resolution western blotting. Nat Protoc. 2016 Aug;11(8):1508-30. doi: 10.1038/nprot.2016.089. Epub 2016 Jul 28. PMID: 27466711; PMCID: PMC5511750.
Time:
Nov 06,2023
描述了如何對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡以測量蛋白質(zhì)表達(dá)水平和蛋白質(zhì)狀態(tài)的細(xì)胞間變異。與傳 統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡一樣,單細(xì)胞蛋白質(zhì)免疫印跡(scWB)對(duì)于缺乏選擇性抗體(例如,亞型)的蛋白質(zhì)靶標(biāo)
以及來自完整細(xì)胞的背景信號(hào)混淆的情況特別有用。scWB 在微器件上進(jìn)行,該微器件包含一系列微孔,這些微孔模塑在聚丙烯酰胺凝膠(PAG)的薄層中。凝膠層在 PAGE 期間既可用作分子篩分基質(zhì),又可在免疫探測期間用作印跡支架。scWB 涉及五個(gè)主要階段:(i)細(xì)胞重力沉降到微孔中;(ii)每個(gè)微孔中細(xì)胞的化學(xué)裂解;(三) 每一單細(xì)胞裂解物的頁數(shù);(iv)凝膠暴露于紫外線下以將蛋白質(zhì)印跡(固定)到凝膠基
質(zhì)中;和(v)固定化蛋白質(zhì)的凝膠內(nèi)免疫探測。多重檢測可以通過使用抗體混合物探測并使用抗體剝離/ 再造技術(shù)來實(shí)現(xiàn),從而能夠檢測每個(gè)細(xì)胞中的 10 多種蛋白質(zhì)。
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