將單細胞懸液滴落到芯片上進行單細胞捕獲,如何確定落到微孔里的是單細胞?
目前常備芯片孔徑有30um、60um、100um,能夠捕獲絕大部分的目的細胞,只需要根據(jù)目的細胞的大小選擇合適的芯片,特殊孔徑可定制芯片。單細胞捕獲過程可以在明場光學顯微鏡下進行操作,通過顯微鏡觀察細胞的落孔情況。
我們先將芯片放置于顯微鏡下,然后將單細胞懸液均勻地滴落到芯片上,細胞依靠重力掉落到微孔內(nèi),落孔率符合泊松分布,正常情況下單細胞落孔率在80%以上,個別孔為2-3個細胞。這個過程中可以根據(jù)樣品細胞的狀態(tài),通過延長落孔時間或者調(diào)整懸液濃度,進一步提高單細胞的落孔率。細胞落孔完成后,清洗掉表面的殘余懸液,再進行后續(xù)實驗。由于落入多個細胞的孔徑得到的蛋白表達數(shù)據(jù)有明顯差異且數(shù)量有限,可以通過智能軟件的處理舍去,就得到了單細胞靶蛋白的表達數(shù)據(jù)。
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