一張芯片單次可檢測2-10個靶蛋白,是一次性孵育10個抗體,還是需要洗脫重孵育呢?
單次檢測10個靶蛋白是通過洗脫重孵育的方式實現(xiàn)的。目前國際上做到的極限是12個,因為剝離抗體對抗原有不可逆的損失,測試的結(jié)果表明,經(jīng)過4次剝離,即使豐度再高的蛋白也檢測不到了。故若一次用3種不同的激發(fā)光檢測3種蛋白,經(jīng)過4次洗脫重孵育,3×4=12,即可檢測12個蛋白。
建議在做單細(xì)胞蛋白檢測之前,先用傳統(tǒng)方法確定目標(biāo)蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)豐度情況,按照豐度從低到高進(jìn)行檢測。目前發(fā)表的文章一般是檢測1-3個蛋白,為了得到更利于發(fā)表的數(shù)據(jù),我們建議單次檢測 1-3個蛋白,洗脫重孵育檢測4-6個蛋白。
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