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單細(xì)胞western對抗體有特殊要求嗎？和傳統(tǒng)western的抗體孵育有何不同？
傳統(tǒng)western能夠孵育的抗體都可以用于單細(xì)胞western。單細(xì)胞western的抗體孵育過程和傳統(tǒng)western 基本一致，室溫下先孵育一抗，然后熒光二抗。區(qū)別在于單細(xì)胞western不需要轉(zhuǎn)膜，電泳分離結(jié)束后，機器會通過紫外光照射將蛋白固定在芯片的凝膠層里，這是該專利技術(shù)的核心。新型光敏凝膠材料的蛋白固定率可以達(dá)到93.8%，蛋白損失小且背景熒光低，故可以直接在芯片上進(jìn)行抗體孵育。
設(shè)備能夠檢測的最低蛋白含量是多少？
目前單細(xì)胞western最低檢測靈敏度是27000個蛋白拷貝數(shù)，分子量范圍約10-180KDA。
利用單細(xì)胞western檢測膜蛋白，需要特殊的制樣流程嗎？
無論是檢測膜蛋白還是胞內(nèi)蛋白，都只需要把樣品制作成單細(xì)胞懸液即可。
完成抗體孵育的芯片的保存條件是什么？能否反復(fù)采集信號？
芯片保存同正常熒光樣品一樣陰涼避光即可，為了獲取更有效的信號數(shù)據(jù)，建議盡快檢測。正常條件下，信號重復(fù)采集5次以內(nèi)，熒光強度沒有太大變化。
如果在蛋白上做一些復(fù)雜的修飾，是否可以檢測出修飾后的蛋白，以及蛋白修飾前后的區(qū)別？
檢測的關(guān)鍵在于抗體，只要有合適的抗體，即使修飾前后的蛋白分子量差別較小，條帶基本重疊也沒有關(guān)系，通過修飾前后蛋白攜帶的不同的熒光基團(tuán)，就可以將表達(dá)量區(qū)分開。
單細(xì)胞western實驗需要用到哪些設(shè)備和耗材？
實驗所需設(shè)備有：單細(xì)胞免疫印跡儀、共聚焦顯微鏡/共聚焦芯片掃描儀、光學(xué)顯微鏡、水平搖床、水浴鍋、抗體孵育槽（袋）、移液槍，耗材有：芯片及試劑、抗體、離心管、ep管。
信號掃描只能用共聚焦顯微鏡嗎，普通熒光顯微鏡能夠顯示嗎？
使用普通熒光顯微鏡或許能夠看到高表達(dá)的熒光，低豐度的就不可以。由于單細(xì)胞內(nèi)蛋白的量是亞皮克級別，熒光強度很低，故需要用到共聚焦顯微鏡，或者熒光芯片掃描儀。
單細(xì)胞western上樣需要多少細(xì)胞？單細(xì)胞懸液的密度有什么要求？上樣方式有哪些？
單細(xì)胞懸液的上樣量一般在400-600uL，密度在10?/ml效果最佳，10000-100000個細(xì)胞/ML均可。通常的上樣方式是滴定自由落孔，樣品很珍貴的情況下，可以采用顯微操作的方式，沒有落入孔的細(xì)胞可以嘗試回收。
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